编号：YYHY00587

篇名：抗黄曲霉毒素B_1纳米抗体的原核表达、纯化及活性分析

作者： 曹冬梅[1] ;许杨[1,2] ;涂追[1] ;付金衡[2] ;李燕萍[2] ;王显显[1]

关键词： 黄曲霉毒素B1 纳米抗体 原核表达 酶联免疫吸附法

机构： [1]南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌330047; [2]南昌大学中德联合研究院,江西南昌330047

摘要： 表达和纯化抗黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）纳米抗体（G8）,并分析纳米抗体的热稳定性及生物学活性,建立基于纳米抗体检测AFB1的ELISA方法。将编码抗AFB1纳米抗体的基因亚克隆至原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21（Rosetta,DE3）,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析蛋白表达情况;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）分析纳米抗体的热稳定性、有机溶剂耐受性、盐离子耐受性及耐酸碱性。结果显示,在大肠杆菌中成功表达可溶性的抗AFB1纳米抗体,表达量为80 mg/L,在25~65℃之间,抗体具有良好的热稳定性。在5%甲醇、p H7.4、10 mmol/L PBS条件下,建立了G8-ELISA检测AFB1的方法,该方法的半抑制浓度（IC50）为4.61 ng/m L,线性范围为0.95~42.45 ng/m L。