编号：YYHY00612

篇名：新型核酸适配体荧光纳米微粒用于人干扰素-γ的测定

作者： 张李钰[1] ;何威[1] ;杨颖[1] ;孙宏利[1] ;宋佳凝[2] ;冯帆[3] ;武海滨[4]

关键词： 核酸适配体 IFN-Γ 磁性纳米颗粒 三明治夹心结构 荧光

机构： [1]西安市儿童医院陕西省儿科疾病研究所,陕西西安710002; [2]西安市儿童医院口腔科,陕西西安710002; [3]沈阳军区总医院药剂科,辽宁沈阳110016; [4]西安市儿童医院儿科重症监

摘要： 目的：利用由两条核酸适配体与人干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）的高亲和力构建的三明治结构和磁性纳米颗粒的磁性分离技术,设计并制作了一种新型荧光纳米微粒,建立基于核酸适配体的新型荧光纳米微粒用于人IFN-γ的检测。方法：流式细胞术检测IFN-γ核酸适配体B1-4和T2对IFN-γ的结合特异性;将生物素修饰的B1-4固定于链霉亲和素包被的纳米磁珠上,连接B1-4的纳米磁珠可通过B1-4与IFN-γ的亲和性捕获IFN-γ,再利用另一条FAM修饰的IFN-γ核酸适配体T2形成（B1-4）-（IFN-γ）-（T2）三明治夹心结构,构建新型核酸适配体荧光纳米微粒;IFN-γ分别与核酸适配体荧光纳米微粒孵育不同时间以探索该检测系统中IFN-γ与磁珠的最佳孵育时间;流式细胞术检测磁珠12 h内荧光变化,探索时间对检测体系的影响;流式细胞术检测与不同浓度IFN-γ孵育的磁珠表面荧光强度,绘制IFN-γ检测标准曲线;检测血清对检测特异性的影响。结果：B1-4和T2对IFN-γ的结合特异性高;三明治夹心结构对IFN-γ检测特异性好,任意改变其中一因素则磁珠表面荧光信号显著下降,三明治夹心结构构建失败;此法对IFN-γ的响应线性浓度为0~50 ng/L,其线性方程为y=3.512x＋1.060,敏感度为1 ng/L;12 h内测得的荧光信号稳定,并无明显衰减;血清对体系检测特异性无明显影响。结论：成功构建核酸适配体荧光纳米微粒用于人IFN-γ的测定。