编号：YYHY007933

篇名：DNA功能化金纳米颗粒在沙眼衣原体检测中的应用

作者： 周朴帆 肖福兵 曾心靛 刘子卿 陈曦 唐婷 陈丽丽

关键词： DNA功能化 金纳米颗粒 沙眼衣原体

机构： 南华大学公共卫生学院卫生检验系

摘要： 目的建立一种基于DNA功能化金纳米颗粒检测沙眼衣原体的新方法。方法分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)Trp B保守基因序列,设计2条特异性寡核苷酸链,一条进行巯基修饰后与柠檬酸钠还原法制备的金纳米颗粒结合得到信号探针,另一条用生物素标记作为捕获探针。制备的靶序列与两种探针在包被链霉亲和素的酶标板内形成牢固的带有金纳米颗粒的核酸复合物,加入银染液后,经酶标仪读取630 nm处A值或肉眼观察96孔板底灰度。对建立的检测体系进行特异性和灵敏度验证。用建立的检测体系及荧光定量PCR法对可疑临床沙眼衣原体样本进行检测。结果制备的金纳米颗粒经透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察确定其粒径约20 nm,吸收峰为518 nm,金纳米颗粒标记的信号探针吸收峰为520 nm;不同靶序列浓度的银染结果可用肉眼进行分辨。优化后的检测体系为:反应时间2 h,杂交温度25℃,生物素探针浓度100 nmol/L,银染色时间8 min。建立的方法能特异性检测沙眼衣原体核酸序列,与其他生殖道病原菌无交叉反应,最低检测浓度达55 pmol/L。49份临床样本检出率为61%,与荧光定量PCR法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立了一种简便、高效、特异的沙眼衣原体检测方法,成本低廉,为沙眼衣原体的临床病原学诊断提供了新的途径。