编号：SH00195

篇名：琼脂糖阳离子交换介质微球的制备及对乳铁蛋白的分离性能

作者： 王文瑾1；王意萱2；曾泽阳3；杨建海1,3；徐偲1,3；郭佳1,3；戴立言1,3

关键词： 琼脂糖微球; SP阳离子交换介质; 层析填料; 蛋白吸附; 乳铁蛋白纯化;

机构： 1.浙江大学衢州研究院2.领科教育上海校区3.浙江大学化学工程与生物工程学院

摘要： 离子交换色谱是蛋白质大规模纯化的常见方法之一。本文以大粒径琼脂糖凝胶微球(BB)(100～300μm)为基质，进行化学交联与配体偶联制备阳离子交换层析介质，并考察对牛初乳中乳铁蛋白(LF)的分离纯化效果。通过对乳化剂种类及用量探究，得到透明圆整且均一的大粒径琼脂糖微球。随后，对基质微球进行化学交联与磺酸基配体偶联，制备耐压达4.5bar的高刚性磺酸基阳离子交换介质(SP-BB)。通过扫描电镜(SEM)和氮气吸脱附测试结果表明SP-BB微球中含有丰富的孔道结构，有利于蛋白分子的吸附。同时，以溶菌酶(LYS)和牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白对SP-BB开展吸附静力学、动力学，以及动态载量(DBC)测试，结果表明自制SP-BB性能优于国产介质，略低于进口介质相当。最后应用自制SP-BB对牛初乳中乳铁蛋白(LF)分离纯化，结果表明SP-BB成功从牛初乳中捕获LF，液相色谱结果表明经一次纯化分离出的乳铁蛋白纯度高达88.8%，回收率为71.2%。本工作为一种大粒径阳离子交换介质的制备及其在牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化提供了新思路。